關于流動相的溫度控制與pH調(diào)節(jié)，在液相色譜分析中至關重要，它們直接影響到分離效果、保留時間、選擇性和峰形等關鍵分析參數(shù)。以下是對這兩個方面的詳細探討：

　　一、流動相的溫度控制

　　溫度作為高效液相色譜（HPLC）系統(tǒng)中的一個重要參數(shù)，對分離效果有著顯著的影響。為了獲得可靠和重現(xiàn)性好的分析結果，精確的溫度控制至關重要。

　　1.溫度對分離效果的影響：溫度直接影響固定相和流動相之間的相互作用力。選擇一個適宜的溫度范圍可以提高分離效率。通常，色譜柱的溫度可以設置在30℃至50℃之間，以獲得較好的分離效果。以硅膠為基質(zhì)的色譜柱最高使用溫度不超過60℃，以低于40℃為宜，特別是在流動相pH接近使用限度時，更應降低使用溫度。

　　2.溫度對保留時間的影響：溫度變化會影響樣品在固定相中的吸附和解吸過程，從而改變保留時間。一般來說，溫度升高會導致保留時間縮短。

　　3.溫度對選擇性的影響：溫度變化可以改變固定相和流動相的性質(zhì)，從而影響選擇性。例如，在反相HPLC中，溫度升高可能會導致疏水性相互作用減弱，從而改變組分的洗脫順序。

　　4.溫度對峰形的影響：主要體現(xiàn)在擴散系數(shù)和流動相粘度的變化上。適當?shù)臏囟瓤刂瓶梢杂行p少峰展寬，獲得更尖銳的峰形。

　　5.溫度控制設備：

　　恒溫箱：是HPLC系統(tǒng)中較常用的溫度控制設備。通過將整個柱子放置在恒溫箱中，可以保持柱溫恒定，從而減少溫度波動對分離效果的影響。

　　柱溫控制器：是一種直接安裝在色譜柱上的溫度控制裝置。它可以通過電加熱或冷卻的方式精確控制柱溫，適用于需要頻繁調(diào)整溫度的實驗。

　　流動相預熱器：用于在進入色譜柱之前對流動相進行預熱。這樣可以減少由于流動相溫度低而導致的柱溫下降，從而提高分離效果。

　　二、流動相的pH調(diào)節(jié)

　　在液相色譜分析中，流動相的pH值對樣品的電離狀態(tài)、保留行為和峰形等均有顯著影響。因此，根據(jù)待測化合物的性質(zhì)選擇合適的pH值至關重要。

　　1.選擇合適的pH值：應注意色譜柱說明書中的pH適用范圍，并避免惡劣的pH條件。同時，pH值的調(diào)整要考慮到待測化合物的pKa值。一般來說，pH值應至少高于pK值兩個單位，以便于化合物的離子化。

　　2.常用的pH調(diào)節(jié)劑：

　　酸類：如甲酸、乙酸和C?HF?O?等。這些酸能夠降低流動相的pH值，但需要注意其揮發(fā)性和對檢測波長的影響。

　　堿類：如氨水和三乙胺等。這些堿能夠提高流動相的pH值，但過高可能會損壞色譜柱中的硅膠顆粒。

　　鹽類：特別是具有緩沖能力的鹽類，如甲酸鹽、乙酸鹽和磷酸鹽等。這些鹽類能夠很好地控制流動相的pH值，并根據(jù)不同緩沖鹽中兩種鹽的配比，可以配置出一定pH的緩沖溶液。但需要注意磷酸鹽流動相體系不易揮發(fā)，對質(zhì)譜和色譜柱的傷害極大。

　　3.pH值對峰形的影響：當化合物的pKa與流動相pH重合時，會導致分子與離子形式共存，化合物的峰型不好。因此，建議將pH控制在化合物的pKa±2的范圍以外，以獲得更尖銳的峰形。

　　流動相的溫度控制與pH調(diào)節(jié)在液相色譜分析中起著至關重要的作用。通過精確的溫度控制和合適的pH值選擇，可以優(yōu)化分離效率、保留時間、選擇性和峰形，從而獲得更加可靠和重現(xiàn)性好的分析結果。